ICH M10指导原则：生物分析方法验证和研究样品分析

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在无可用基质的情况下（例如短缺、3R原则-减少、优化、替代），是否可以使用类似的替代基质（例如人血浆）稀释样品？

可以，只要替代基质的使用符合指导原则的建议，包括准确度和精密度、无干扰等，并以相同的方式处理稀释质控样品（QC）。需要充分论证理由，原因在于上述方法可能会受到质疑。

2,3,4

在研究样品分析期间添加新的QC浓度水平，而不改变色谱分析或配体结合分析中的校准曲线范围时，是否有必要通过部分验证来验证新的QC浓度水平？

在新的QC浓度水平应用于研究样品分析之前，应对其精密度和准确度加以证明。上述可作为部分验证或作为生物分析报告的注释加以记录。

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是否可接受根据零浓度样品的分析结果证明IS本身、任何杂质或其同位素稳定性不存在分析干扰？

是的，这对方法验证和研究样品分析均适用。

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关于长期稳定性，失败的时间点是否意味着不应继续推进后面的时间点？

可对其他时间点进行评价。应对任何不符合要求的情况进行调查，以确定根本原因和对稳定性评估的影响。

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有关物质的理化性质是否可用于证明在质谱（MS）分析期间有关物质不会共洗脱或干扰分析物测定？

是的，但如果不能通过排除有关物质和分析物存在共洗脱，则需要进行额外研究以证明色谱分离（例如，对于异构体）。如果分析物和有关物质共洗脱，则应评价基质效应（离子抑制/增强）和回复转化。

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如何验证储备溶液是否准确制备？

通过比较两份单独制备的储备溶液并证明其实测响应值的差异在5%以内。

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当分析物是免疫球蛋白且检测方法包括分析物特异性试剂（例如，使用抗独特型抗体作为捕获和/或检测试剂）时，是否需要在验证中用不相关的免疫球蛋白检测特异性？

只要在试剂特性鉴定期间已对试剂的特异性进行了评价，则无需用不相关的免疫球蛋白评估特异性。

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应如何对关注事项或已测样品再分析（ISR）失败的可能性进行调查？

应按SOP开展调查，并应考虑整个过程，包括样品处理、加工和分析。还应包括科学评估是否存在影响生物分析方法的问题，例如干扰和不稳定性。

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鉴于M10允许对种属内基质或种属间相同基质进行部分验证，是否允许在非临床研究采用的色谱方法中使用N-in-1方法（1次验证中使用多个种属或基质）？

也可以使用这种方法。但是，在使用这种方法时应谨慎；需要充分论证理由，原因在于上述方法可能会受到质疑。